cAMP ELISAkit-neweast

武汉纽斯特生物科技有限公司（d），cAMP ELISAkit，系美国生命科学试剂供应商美国NewEastBio在中国的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域，主要产品有小分子、ELISA试剂盒、蛋白等，与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳定的合作关系，产品销往。

体外用GTPγS/GDP处理蛋白以用作阳性和阴性的对照

注意：在细胞体内环境条件下大约有10%的Ras被激l活，而在体外用GTPγS处理大约有90%的Ras被激l活。

1.        

准备两个离心管，每个管中各加入0.5 mL的细胞提取物（如果是纯的Ras蛋白则每个管中加入的蛋白量为1ug）。

2.        

每个管中加入20ul 0.5M EDTA(终浓度即为20 mM)。

3.        

一个管中加入5ul的100X GTPγS（终浓度即为100 uM）作为阳性对照。另一个管中加入5ul的100X GDP（终浓度即为1 mM）作为阴性对照。

4.        

将离心管置于30°C条件下反应30 min并不断搅动。

5.        

终止反应：将管置于冰上并加入32.5ul 1M MgCl2(终浓度即为60mM)。

灵敏度

通过比较10个B0孔平均光密度值(OD)和10个5号管标准品的平均光密度值，计算出灵敏度。cAMP浓度的检测极限通过标准曲线上0位置的两个标准偏差来测定。

OD(B0平均数) =0.685± 0.003

OD（5号 标准品平均数）=0.604± 0.010

光密度偏差(0-0.4 pmol/mL) =0.081

2 SD's of the Zero Standard =0.006

灵敏度 =081.0006.0/0.8×0.4 pmol/mL =29.6 fmol/mL

纽斯特生物开发出了鼠单克l隆抗l体的cAMP ELISA 检测试剂盒。该单克l隆抗l体对cAMP的特异性比cAMP、ATP等类似的小分子高出108 倍以上。相较于其他的多克l隆抗l体cAMP试剂盒，纽斯特生物cAMP ELISA试剂盒能显著的提高其灵敏性和特异性，且能有效避免来自动物多克l隆抗l体的批次间差异， 因此可以提供长久有效地可重复性定量检测。