neweast-cAMP ELISAkit

ELISA检测试剂盒应用定性夹心免l疫检测技术，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条，这些多肽是中国型HEV毒株氨基酸序列中抗原性很强的肽段，分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗l体，这些抗l体就会与HEV 的多肽抗原结合，并固定在上面，洗板除去其它非特异性抗l体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根过氧化物酶）酶结合物，经第二次孵育后，酶结合物就会与头一次孵育结合上的HEV IgM抗l体相结合，洗板除去未结合的酶结合物，cAMP ELISAkit，加入TMB底物溶液，在第三次孵育时会发生酶-底物反应，只有那些含有HEV IgM抗l体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化，加入硫酸溶液终止酶和底物间的反应，并在波长: 450nm处测量O.D.值，按照本HEV IgM抗l体elisa试剂盒的测试标准， O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。

武汉纽斯特生物科技有限公司（d），系美国生命科学试剂供应商美国NewEastBio在中国的子公司。.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域，主要产品有小分子、ELISA试剂盒、蛋白等，与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳定的合作关系，产品销往世界。

cGMP作为的第二信使，可调节细胞对各种外源和内源信号分子的反应。 cGMP主要通过激l活蛋白激酶、控制特定的离子通道、磷酸二酯酶调节细胞环核苷酸浓度来调节不同的生理过程（8），如血管平滑肌松弛、上皮细胞电解质运输、骨生长、白细胞迁移、轴突引导、精l子运动、血小板蔓延以及血管通透性等（1-9）。

使用前将各种试剂取出放置30分钟，平衡至室温。所有标准品和样品必需设置平行对照实验。

快速加入试剂至样品中，立即漩涡震荡2秒混匀。

1. 依据实验键盘纸决定酶标条的使用量，将剩余的酶标条连同干燥剂一起放回密封塑料袋，密封，4℃保存。

2. 移取50μL中和液至各个微孔中，除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。

3. 移取100μL 0.1M HCl至NSB(非特异结合)孔和B0孔(0 pmol/mL cAMP标准品)。

4. 移取100μL cAMP标准品至相应的孔。

5. 移取100μL样品至相应的孔。

6. 移取50μL 0.1M HCl至NSB(非特异结合)孔。7. 移取50μL 偶联酶至各孔中，除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。

8. 移取50μL 抗l体工作液至各孔中，除了TA(全活性)孔、Blank(空白)孔和NSB(非特异结合)孔。

9. 将酶标孔置于孔板振动器上，250~500rpm，室温孵育2小时。

10. 在吸水纸上拍干微孔内溶液，加洗涤液400μL每孔洗3次，每次需拍干。

11. 后一次洗涤，清空各微孔，在干净的无尘吸水纸上轻巧酶标板数次，以确保没有洗涤液残留。

12. 加5μL 偶联酶至TA(全活性)孔。

13. 每孔200μL显色底物溶液，于室温静置5~30分钟。（显色底物A和B需在临用前15分钟内等体积混合，并避光放置。）

14. 每孔加入50μL终止液。终止后立即读数。

15. 清除酶标l仪Blank(空白)孔值，读取450nm处的光密度值，在570nm至590nm之间有修正。如果酶标l仪不能自动清除Blank(空白)孔值，那么手动扣除每个读数的Blank(空白)孔光密度值。