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发布时间:2022-09-07 18:52:00 作者:武汉纽斯特
实验步骤
使用前将各种试剂取出放置30分钟,平衡至室温。所有标准品和样品必需设置平行对照实验。
快速加入试剂至样品中,立即漩涡震荡2秒混匀。
1. 依据实验键盘纸决定酶标条的使用量,将剩余的酶标条连同干燥剂一起放回密封塑料袋,密封,4℃保存。
2. 移取50μL中和液至各个微孔中,除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。
3. 移取100μL 0.1M HCl至NSB(非特异结合)孔和B0孔(0 pmol/mL cAMP标准品)。
4. 移取100μL cAMP标准品至相应的孔。
5. 移取100μL样品至相应的孔。
6. 移取50μL 0.1M HCl至NSB(非特异结合)孔。7. 移取50μL 偶联酶至各孔中,除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。
8. 移取50μL 抗l体工作液至各孔中,除了TA(全活性)孔、Blank(空白)孔和NSB(非特异结合)孔。
9. 将酶标孔置于孔板振动器上,250~500rpm,室温孵育2小时。
10. 在吸水纸上拍干微孔内溶液,加洗涤液400μL每孔洗3次,每次需拍干。
11. 后一次洗涤,清空各微孔,在干净的无尘吸水纸上轻巧酶标板数次,以确保没有洗涤液残留。
12. 加5μL 偶联酶至TA(全活性)孔。
13. 每孔200μL显色底物溶液,于室温静置5~30分钟。(显色底物A和B需在临用前15分钟内等体积混合,并避光放置。)
14. 每孔加入50μL终止液。终止后立即读数。
15. 清除酶标l仪Blank(空白)孔值,读取450nm处的光密度值,在570nm至590nm之间有修正。如果酶标l仪不能自动清除Blank(空白)孔值,那么手动扣除每个读数的Blank(空白)孔光密度值。
武汉纽斯特生物科技有限公司(WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd),系美国生命科学试剂供应商美国NewEastBio在中国的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域,主要产品有小分子、ELISA试剂盒、蛋白等。
一、高l效、灵敏、特异的抗l体;二、稳定的重复性和可靠性;三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;四、适用血l清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;五、节省实验经费。
固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙l烯、聚苯乙l烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙l烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
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